JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 visualizzazioni • 1:28 min • October 30th, 2025
Prendete una coltura di Corynebacterium glutamicum, trasformata con un plasmide che trasporta un gene reporter fluorescente a valle dell'anti-terminatore dell'acido ribonucleico o della sequenza RAT, in una piastra a più pozzetti.
Durante la trascrizione, il RAT-RNA forma una struttura stem-loop che blocca l'RNA polimerasi, arrestando l'espressione del gene reporter.
Il plasmide esprime anche costitutivamente LicV, una proteina di fusione che comprende la proteina legante l'RNA del ratto, LicT, e il dominio VVD sensibile alla luce blu.
Nell'oscurità, LicV rimane monomerico e non si lega allo stem-loop RAT-RNA, che blocca la trascrizione del gene reporter.
Illuminare la coltura con luce blu per indurre un cambiamento conformazionale nel dominio VVD, che innesca la dimerizzazione di LicV.
Il LicV dimerizzato si lega al RAT-RNA, dispiegando la struttura stem-loop e consentendo all'RNA polimerasi di trascrivere il gene reporter, producendo la proteina reporter fluorescente.
Osservare la coltura al microscopio a fluorescenza.
La forte fluorescenza del reporter dopo l'illuminazione a luce blu e la fluorescenza minima al buio confermano il successo del controllo optogenetico.