Arricchimento di lipoproteine batteriche mediante separazione di fase con detergente non ionico

Prendi un lisato batterico contenente proteine idrofile, lipoproteine e aggregati proteici.

Aggiungere un detergente freddo, non ionico, in grado di separare le fasi a temperature più calde.

Incubare su ghiaccio e mescolare periodicamente. Il detergente si lega alla porzione lipidica della lipoproteina, formando complessi proteina-detergente.

Scaldare la miscela per indurre la separazione di fase. Le lipoproteine si concentrano nella fase detergente, mentre le proteine idrofile rimangono nella fase acquosa.

Centrifugare a temperatura ambiente per mantenere la separazione bifasica.

Scartare la fase acquosa, aggiungere un tampone freddo alla fase detergente e mescolare.

Ripetere il ciclo di raffreddamento, riscaldamento e centrifugazione per arricchire le lipoproteine.

Quindi, aggiungere un tampone freddo e centrifugare a bassa temperatura per pellettare gli aggregati non lipoproteici.

Trasferire il surnatante in una provetta contenente un solvente che precipita le proteine e incubare a temperatura inferiore allo zero per far precipitare le lipoproteine.

Centrifugare a temperatura ambiente ed eliminare il surnatante.

Le lipoproteine precipitate sono pronte per gli studi a valle.

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