JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 3:28 min. • October 30th, 2025
Iniziare con una soluzione di resina a scambio ionico contenente gruppi funzionali caricati positivamente per il legame selettivo delle proteine.
Successivamente, prendi un estratto proteico ottenuto da cellule batteriche ospiti ingegnerizzate per sovraesprimere un fattore di virulenza dal batterio patogeno Helicobacter pylori.
L'estratto contiene il fattore di virulenza target insieme alle proteine della cellula ospite in un tampone a pH 8.
Mescolare l'estratto proteico con la resina e incubare agitando per garantire un'interazione uniforme proteina-resina.
Le proteine ospiti, avendo punti isoelettrici inferiori al pH del tampone, si caricano negativamente e si legano alla resina caricata positivamente.
La proteina bersaglio, con un punto isoelettrico vicino al pH del tampone, rimane in gran parte priva di carica e rimane non legata.
Trasferire l'impasto proteico-resinoso in una colonna cromatografica e lasciare che la resina si depositi.
Raccogliere la fase liquida contenente la proteina bersaglio non legata.
Sciacquare la resina con il tampone per garantire il massimo recupero della proteina bersaglio.
Per preparare 15 millilitri di resina DEAE, sospendere 0,6 grammi di polvere secca di
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