Generazione di un ceppo reporter fluorescente in Pseudomonas aeruginosa

Inizia con una coltura elettrocompetente di Pseudomonas aeruginosa sospesa in un tampone di saccarosio a bassa conducibilità.

Aggiungere un plasmide che codifica per la proteina fluorescente verde (GFP) sotto un promotore ciclico di-GMP-responsive e un marcatore di resistenza all'ampicillina.

Miscelare e trasferire la sospensione in una cuvetta per elettroporazione pre-raffreddata.

Pulire e inserire la cuvetta in un elettroporatore.

Applicare impulsi elettrici per formare pori transitori nella membrana batterica. Questo facilita l'ingresso del plasmide nel citoplasma.

Dopo l'elettroporazione, la membrana si richiude, intrappolando il plasmide all'interno.

Togliere la cuvetta, aggiungere il terreno fresco, mescolare e trasferire i batteri in un tubo.

Incubare per consentire ai batteri di esprimere il gene di resistenza all'ampicillina e la GFP.

Distribuire la coltura su una piastra di agar ricca di sostanze nutritive integrata con ampicillina e incubare. I batteri che contengono il plasmide reporter crescono e formano colonie.

Osservare la lastra al microscopio a fluorescenza. La fluorescenza verde conferma il successo della generazione del ceppo reporter fluorescente.

Aggiungere un microlitr