JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:52 min • October 30th, 2025
Iniziare inoculando una sospensione di batteri che riducono i metalli in un terreno di coltura con ioni metallici.
Incubare con rotazione per favorire la crescita e facilitare l'assorbimento degli ioni metallici.
Gli ioni metallici si diffondono nelle cellule e vengono ridotti enzimaticamente in ossidi metallici insolubili.
Questi ossidi vengono escreti e nucleati vicino alla membrana batterica, dove si autoassemblano in microcapsule rigide di ossido metallico all'esterno delle cellule.
Dopo l'incubazione, ultrasonicare la sospensione per dissociare i batteri dalle microcapsule.
Centrifugare la miscela per pellettare le microcapsule dense e scartare il surnatante.
Lavare il pellet con acqua, quindi eseguire l'ultrasuoni. Centrifugare nuovamente per separare i batteri dalle microcapsule.
Quindi, aggiungi etanolo per ridurre la tensione superficiale.
Effettuare nuovamente gli ultrasuoni per rimuovere eventuali batteri rimanenti e disperdere le microcapsule.
Centrifugare nuovamente ed eliminare il surnatante.
Ripetere il lavaggio con etanolo.
Infine, sigillare le provette per evitare l'essiccazione e la deformazione delle microcapsule purificate.
Recuperare la coltura contenente i batteri monoclonali e aggiungerne 50 microlitri in ciascuna delle dieci provette da centrifuga da 50 millilitri contenenti il terreno di tungstato di sodio.
Incubare le dieci provette in un'incubatrice a 37 gradi Celsius per 120 ore. Dopo l'incubazione, posizionare ciascuna delle provette in un ultrasuonatore e sonicare le cellule a 20 kilohertz con 150 watt per un'ora.
Centrifugare le provette e quindi rimuovere il liquido limpido con una pipetta.
Quindi, aggiungere acqua, quindi sonicare e centrifugare le provette ancora una volta.
Dopo la seconda centrifugazione, rimuovere il liquido limpido nelle provette con una pipetta.
Quindi aggiungere 35 millilitri di etanolo al 99,8% e ultrasonicare nuovamente i campioni.
Sciacquare i minerali centrifugandoli, aggiungendo alcol e sonicando il campione ancora una volta.
Quindi, rimuovere il liquido limpido nelle provette con una pipetta e tappare immediatamente le provette senza asciugare il campione.