JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 3:37 min. • October 30th, 2025
Prendi una coltura di Lactococcus lactis che esprime la peptidasi legata alla membrana NisP.
Mescola la coltura con un terreno ricco di sostanze nutritive.
Aggiungere l'agar fuso, mescolare e versare in un piatto per distribuire uniformemente il L. lactis nell'agar.
Una volta solidificato, perforare i pozzetti nell'agar.
Successivamente, prendiamo E. coli ricombinante che produce varianti precursori wild-type o modificate del peptide antimicrobico nisina.
Centrifugare per pellettare i batteri, scartare i surnatanti e risospendere i pellet nel tampone.
Sonicare per lisare i batteri, centrifugare e trasferire i surnatanti in provette fresche.
Normalizzare i lisati alla stessa densità ottica utilizzando il tampone per garantire livelli costanti di peptidi.
Pipettare ogni campione in singoli pozzetti di agar e incubare i campioni.
Durante l'incubazione, i peptidi precursori della Nisina si diffondono nell'agar e vengono scissi da NisP, generando nisina matura.
La nisina matura inibisce la crescita di L. lactis , formando aloni chiari intorno al pozzo.
Confronta le dimensioni dell'alone per valutare l'attività antimicrobica delle varianti di nisina.
Aggiungere un millilitro di Lactococcus lactis pr
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