JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:49 min. • October 30th, 2025
Prendi una coltura stock di Bacillus mycoides, un rizobatterio che promuove la crescita delle piante, e spruzza un inoculo su una piastra di coltura.
Incubare la piastra per favorire la proliferazione batterica nelle colonie.
Inoculare una singola colonia in un mezzo liquido e incubare agitando per favorire la crescita batterica.
Diluire la coltura utilizzando il terreno liquido per ottenere la densità ottimale per il saggio.
Aggiungi essudati di radice di patata alla coltura per emulare le interazioni pianta-microbi.
Incubare la coltura con agitazione, facilitando l'interazione delle molecole di segnalazione con i recettori batterici.
Questa interazione induce vie di segnalazione che attivano le proteine regolatorie, che si legano al DNA e alterano l'espressione genica.
Trasferire la coltura in una provetta e far girare le cellule batteriche in un pellet.
Scartare il surnatante e immergere la provetta nell'azoto liquido per congelare le cellule.
Conservare le cellule per analizzare i cambiamenti indotti dall'essudato delle radici delle piante nell'espressione genica batterica.
Per far crescere i batteri, striare un ceppo di B. mycoides da una scorta di glicerolo a meno 80 gradi Celsius su una piastra di agar LB e incubare la piastra a 30 gradi Celsius durante la notte. Quindi inoculare il terreno liquido LB con una singola colonia dalla piastra e far crescere la coltura in un incubatore agitatore a 200 giri/min durante la notte a 30 gradi Celsius.
Per trattare e campionare i batteri, diluire una coltura di B. mycoides durante la notte con 90 millilitri di terreno LB preriscaldato fino all'ODiniziale di zero virgola zero cinque in un pallone da 300 millilitri. Successivamente, aggiungere 10 millilitri di essudati radicali alla coltura e utilizzare un trattamento con acqua sterile e deionizzata da 10 millilitri come controllo. Quindi incubarli a 30 gradi Celsius per un'ora.
Dopo un'ora, trasferire la coltura in provette da centrifuga da 50 millilitri. Raccogliere le cellule dalla coltura mediante centrifugazione a 9.000 volte G per due minuti a quattro gradi Celsius. Successivamente, scartare il surnatante e congelare immediatamente il pellet in azoto liquido.
Quindi conservarlo a meno 80 gradi Celsius fino al momento dell'uso.