Saggio di crescita batterica limitata ai metalli per studiare il ruolo dei geni sensibili ai metalli

Prendiamo i batteri wild-type e i batteri mutanti che mancano di uno specifico gene reattivo ai metalli presente nel wild-type.

I batteri vengono coltivati in terreni impoveriti di metalli per esaurire le loro riserve metalliche interne.

In questo ambiente impoverito di metalli, il gene reattivo ai metalli nei batteri wild-type è attivato ed esprime un recettore di superficie, che è assente nei batteri mutanti.

Diluire le colture per garantire una densità cellulare uniforme.

Prendi una piastra multipozzetto contenente un complesso metallo-proteina.

Aggiungere le colture diluite ai pozzetti.

Incubare la piastra all'interno di un lettore di piastre mantenuto a temperatura controllata con agitazione per favorire una crescita batterica ottimale.

Misurare l'assorbanza a intervalli regolari per monitorare la crescita batterica nel tempo.

Nei batteri wild-type, il recettore metallico consente l'estrazione dello ione metallico dal complesso, supportandone la crescita.

I batteri mutanti mostrano una crescita limitata in quanto non riescono a estrarre lo ione metallico dal complesso senza i recettori metallici.

Aggiungere 10 microlitri di premiscela 10X e 90 microlitri di CDM a ciascuno dei tre pozzet