JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:17 min • October 30th, 2025
Inizia con un topo soppresso con una trachea esposta. I polmoni del topo erano pre-infettati da Haemophilus influenzae non tipizzabile, un batterio patogeno.
Inserire un catetere nella trachea e collegarlo a una siringa riempita con tampone di lavaggio.
Somministrare il tampone di lavaggio contenente un anticoagulante per prevenire la formazione di coaguli di sangue e uno zucchero per preservare l'integrità cellulare.
Aspirare delicatamente per recuperare il liquido di lavaggio broncoalveolare contenente globuli rossi, cellule immunitarie e agenti patogeni residui.
Ripetere la procedura e raggruppare il liquido di lavaggio recuperato in un'unica sospensione.
Prelevare un'aliquota dalla sospensione raggruppata e centrifugare per separare le cellule. Scartare il surnatante.
Risospendere le cellule in un tampone di lisi per lisare selettivamente i globuli rossi.
Centrifugare per separare le cellule rimanenti e scartare il surnatante contenente detriti.
Risospendere le celle rimanenti in un buffer.
La sospensione finale, contenente cellule immunitarie e batteri residui, è pronta per l'analisi a valle.
Esporre la parte ventrale del polmone per accedere alla trachea. Intubare la trachea con un catetere calibro 20.
Utilizzando il catetere, instillare 0,8 millilitri di tampone BALF e raccogliere il lavaggio mediante aspirazione dentale. Ripetere questa procedura altre tre volte, raggruppando le quattro raccolte di lavaggio in un'unica sospensione.
Prelevare un'aliquota da 100 microlitri e centrifugare per due minuti a 2.000 giri/min.
Rimuovere il surnatante e risospendere nel tampone di lisi dei globuli rossi. Giralo verso il basso e rimetti in sospensione il pellet con 1X PBS.