Sintesi di antigeni proteici di membrana stabilizzati con nanodischi utilizzando un sistema privo di cellule

Prendiamo un sistema batterico privo di cellule che manca di strutture cellulari intatte ma conserva i componenti molecolari necessari per la trascrizione e la traduzione in vitro .

Introdurre plasmidi che codificano l'antigene della proteina di membrana e la proteina dell'impalcatura, insieme a fosfolipidi e polimeri sintetici.

Integrare la miscela con ATP, GTP e un mix di aminoacidi per avviare la sintesi proteica.

Contemporaneamente, preparare una soluzione alimentare arricchita con la miscela di aminoacidi.

Caricare la miscela nella camera interna e la soluzione di alimentazione nella camera esterna di un dispositivo di dialisi a doppio scompartimento.

Durante l'incubazione, i substrati si diffondono dalla camera esterna a quella interna attraverso la membrana semipermeabile, facilitando la trascrizione plasmidica e la traduzione proteica.

La proteina scaffold assembla i fosfolipidi e i polimeri in nanodischi lipidici e facilita il ripiegamento e l'incorporazione dell'MPA in queste strutture.

I sottoprodotti generati durante la reazione si diffondono nella camera esterna, mantenendo le condizioni ottimali per la formazione di MPA stabilizzato con nanodischi.

Preparare i MOMP-tNLP utili