JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:15 min • September 26th, 2025
I plastoglobuli sono goccioline ricche di lipidi nel citoplasma dei cianobatteri.
Immagazzinano lipidi neutri all'interno di un nucleo idrofobo, circondato da un monostrato lipidico anfipatico con proteine strutturali ed enzimatiche incorporate. I lipidi immagazzinati vengono mobilizzati durante lo stress per supportare le funzioni cellulari.
Per isolarli, inizia con una frazione grezza di plastoglobulo ottenuta dai cianobatteri. Questa frazione è arricchita in plastoglobuli e include alcune proteine contaminanti residue.
Mescolare questa frazione con una soluzione di saccarosio più densa e trasferirla in una provetta per ultracentrifuga.
Sovrapporre con una soluzione di saccarosio più leggera per creare un gradiente di densità discontinuo.
Centrifugare ad alta velocità in condizioni di freddo per evitare la degradazione termica dei plastoglobuli.
Il gradiente separa i componenti in base alla densità: i plastoglobuli ricchi di lipidi e a bassa densità galleggiano verso l'alto, mentre i contaminanti più densi e ricchi di proteine affondano.
Raccogliere i plastoglobuli purificati e congelarli in un mezzo di congelamento per preservarne la struttura.
Conservare a temperature estremamente basse per un uso a lungo termine.
Per raccogliere plastoglobuli puri dai cianobatteri, creare un gradiente di saccarosio, come accennato in precedenza, utilizzando 500 microlitri di plastoglobuli grezzi, 750 microlitri di terreno R 0,7 e 750 microlitri di terreno R 0,2. Dopo la centrifugazione, raccogliere i plastoglobuli puri in una provetta da 1,5 millilitri e aliquotare i plastoglobuli puri. Una volta terminato, congelare le aliquote di plastoglobuli puri in azoto liquido e conservarle direttamente a meno 80 gradi Celsius o liofilizzare in una polvere secca.