JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 3:22 min. • October 30th, 2025
Inizia con vermi adulti di C. elegans privi di germi sospesi in un terreno.
Introdurre il batterio in esame e incubare.
Mentre i vermi si nutrono, i batteri entrano nel lume intestinale e aderiscono all'epitelio.
Centrifugare per pellettare i vermi e rimuovere i batteri non ingeriti.
Risospendere in tampone, centrifugare e rimuovere i batteri rimanenti non ingeriti.
Aggiungere terreni contenenti E. coli uccisi con il calore e incubare.
Durante l'alimentazione, l'E. coli ucciso con il calore sposta ed espelle i batteri di prova non aderenti dal lume intestinale.
Centrifugare e rimuovere il surnatante contenente i batteri espulsi.
Lavare con tampone, centrifugare e rimuovere il surnatante.
Raffreddare i vermi sul ghiaccio per indurre la paralisi, prevenendo un'ulteriore ingestione.
Aggiungere una soluzione di candeggina e incubare per uccidere i batteri esterni residui.
Rimuovere la candeggina e aggiungere un tampone freddo.
Centrifugare e rimuovere il surnatante per eliminare i residui di candeggina.
I vermi ora conservano solo i batteri di prova vitali che aderiscono all'epitelio intestinale, consentendo la quantificazione della colonizzazione.
Iniziare rimettendo in sospensione il campione di verme in un millilitro di M9TX-01 in una provetta da microcentrifuga. Raccogliere i vermi adulti mediante centrifugazione e scartare il surnatante. Utilizzando gli stessi parametri di centrifugazione, sciacquare i vermi due volte con un millilitro di M9TX-01 e una volta con un millilitro di tampone per vermi M9 per ridurre al minimo i batteri esterni. Quindi, risospendere ciascun campione in un millilitro di terreno S più 2 volte OP50 termicamente ucciso a caldo in una provetta di coltura. Incubare le provette a 25 gradi Celsius per 20-30 minuti per far passare i batteri non aderenti dall'intestino.
Dopo l'incubazione, sciacquare due volte i vermi spurgati con un millilitro di M9TX-01 freddo e scartare il surnatante. Metti i tubi sul ghiaccio per 10 minuti per paralizzare i vermi. Quindi, aggiungi un millilitro di tampone per vermi M9 ghiacciato con candeggina non profumata in ogni tubo.
Incubare le provette su ghiaccio per un minimo di 10 minuti per uccidere i batteri esterni. Scartare il tampone di candeggina e rimettere i tubi nel ghiaccio per evitare che i vermi. Quindi, aggiungere un millilitro di M9TX-01 freddo a ciascuna provetta e centrifugare per cinque secondi in una mini centrifuga. Rimettere i tubi nel ghiaccio e rimuovere il surnatante. Ripetere questo passaggio una volta.