Interruzione meccanica di singoli vermi per valutare la variabilità nelle interazioni ospite-batteri

Iniziare con vermi adulti di C. elegans appena uccisi con cuticole permeabilizzate, sterili e appena uccisi, sospesi in tampone.

Questi vermi sono infettati da batteri nei loro tratti intestinali.

Prendere una piastra a pozzetti profondi contenente particelle abrasive in un tampone e trasferire un singolo verme in ogni pozzetto.

Coprire il piatto con pellicola sigillante e un coperchio.

Incubare la piastra a bassa temperatura per evitare il surriscaldamento durante la rottura dei tessuti.

Premere il coperchio per sigillare i pozzetti.

Utilizzando un disgregatore di tessuti, agitare meccanicamente la piastra. Le particelle abrasive distruggono i tessuti dei vermi, rilasciando batteri intestinali.

Picchiettare la piastra e centrifugarla per pellettare il contenuto.

Mescolare il contenuto per distribuire uniformemente i batteri, quindi trasferirli in pozzetti freschi.

Diluire in serie la sospensione batterica in tampone.

Piastra le diluizioni su piastre di agar e incuba per consentire la formazione di colonie.

Contare le colonie per quantificare la variazione della carica batterica intestinale tra i singoli vermi.

Per prepararsi alla disgregazione meccanica dei vermi, procurarsi una piastra steri