Quantificazione della polarità e della dinamica di un componente del sistema di secrezione nella Legionella pneumophila

Iniziare con la Legionella pneumophila, un patogeno respiratorio che esprime un componente del sistema di secrezione marcato in fluorescenza necessario per l'infezione dell'ospite.

Per quantificare la polarità di questi componenti, acquisire immagini a fluorescenza e regolare il contrasto per distinguere le singole cellule.

Posizionare regioni rettangolari dal polo cellulare verso il citoplasma per misurare i gradienti di fluorescenza.

Maschera queste regioni per estrarre l'intensità media e la varianza, quindi calcola i punteggi di polarità come rapporti varianza-intensità media.

Alti punteggi di polarità indicano un reclutamento mirato di componenti ai poli batterici.

Per le misurazioni dinamiche, acquisisci due immagini time-lapse e regola il contrasto per visualizzare chiaramente le cellule.

Posizionare le regioni quadrate al centro della cellula per misurare la fluorescenza citosolica.

Maschera intere celle per correggere il fotosbiancamento e definisci le regioni di sfondo tra le celle per la sottrazione del rumore.

Esporta tutte le intensità e calcola la variazione della fluorescenza nel tempo.

L'aumento dell'intensità indica il raggruppamento, mentre la diminuzione dell'intensità ri