JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:48 min • October 30th, 2025
Prendi una provetta contenente una coltura di Vibrio natriegens, un batterio a crescita rapida.
Centrifugare la coltura per pellettare i batteri. Eliminare il surnatante contenente il terreno residuo.
Risospendere il pellet batterico in un terreno fresco e trasferirlo in un pallone conico contenente lo stesso terreno per la preparazione della coltura batterica.
Incubare la coltura con agitazione in condizioni aerate.
A causa di un breve tempo di generazione, Vibrio natriegens utilizza i nutrienti e si divide rapidamente per generare una popolazione batterica concentrata.
Utilizzando uno spettrofotometro, monitorare regolarmente la densità ottica (OD) per determinare la concentrazione batterica.
Far crescere la coltura fino a quando l'OD raggiunge circa uno, indicando una fase di crescita esponenziale con un'elevata attività metabolica.
Trasferire la coltura in provette da centrifuga.
Centrifugare a bassa temperatura per separare i batteri preservando l'integrità cellulare.
Posizionare il tubo sul ghiaccio e rimuovere il surnatante contenente detriti cellulari.
Conservare il pellet batterico a temperatura ultrabassa per l'analisi a valle.
Per iniziare, lavare un millilitro della coltura di Vibrio natriegens durante la notte centrifugandolo in una centrifuga da banco a 10.600 volte g per un minuto.
Aspirare il surnatante senza disturbare il pellet e risospendere in un millilitro di terreno LB-V2 fresco. Inoculare un millilitro di coltura notturna lavata in un litro di terreno di coltura LB-V2 fresco in un pallone di Erlenmeyer autoclavato da 4 litri con coperchio sterile per ottenere un rapporto di diluizione di uno a mille. Coltiva la coltura a 30 gradi Celsius agitando a 225 giri/min.
Usa uno spettrofotometro per monitorare l'OD 600 della coltura e, quando raggiunge 1,0 più o meno 0,2, raccogli la coltura centrifugandola in due provette da 500 millilitri a 3.500 volte g per 20 minuti a quattro gradi Celsius, quindi mettila sul ghiaccio. Aspirare il surnatante e lavorare immediatamente il pellet.