JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 3:58 min. • October 30th, 2025
Assumere una sospensione di Vibrio natriegens, che ha un alto tasso di sintesi proteica, in un tampone refrigerato per prevenire la degradazione cellulare.
Centrifugare a freddo.
Scartare il surnatante per rimuovere i contaminanti.
Risospendere il pellet in un piccolo volume di tampone refrigerato.
Utilizzando una punta a foro largo, trasferire la sospensione in una provetta da microcentrifuga per evitare il taglio meccanico.
Mescolare la sospensione e posizionare il tubo in un supporto posizionato sul ghiaccio.
Abbassare la punta del sonicatore nella sospensione.
Avviare la sonicazione per interrompere la membrana cellulare e rilasciare il contenuto citoplasmatico.
Centrifugare per separare i detriti cellulari insolubili.
Raccogliere il surnatante o l'estratto di cellule grezze contenente il contenuto citoplasmatico in una nuova provetta.
Congelare l'estratto cellulare in azoto liquido per preservarne la bioattività.
Conservare a temperature ultra-basse per un ulteriore utilizzo nell'espressione proteica priva di cellule.
Raffreddare il tampone di lisi S30 appena preparato a pH 7,7 a circa quattro gradi Celsius, utilizzare 10 millilitri di questo tampone di lisi S30 freddo per risospendere tu
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