Trasformazione naturale ed espressione della GFP nel cianobatterio filamentoso Phormidium lacuna

Prendete una coltura di Phormidium lacuna, un cianobatterio filamentoso.

Omogeneizzare la coltura per disperdere i filamenti, quindi centrifugare per pellettare i batteri.

Scartare il surnatante e risospendere il pellet in un terreno ricco di sostanze nutritive.

Aggiungere il DNA plasmidico contenente la proteina fluorescente verde e i geni di resistenza agli antibiotici su una piastra di agar integrata con antibiotici.

Aggiungere la sospensione batterica sul DNA e incubare in condizioni di luce.

I batteri internalizzano il DNA utilizzando pili di tipo IV. I geni introdotti si integrano in una delle molteplici copie del genoma batterico.

Ridistribuire i batteri su una piastra di agar integrata con antibiotici per selezionare i batteri trasformati.

Al microscopio ottico, identifica i filamenti verdi sani che indicano una trasformazione riuscita.

Trasferire i filamenti selezionati in terreni liquidi con una maggiore concentrazione di antibiotici per arricchire la popolazione trasformata.

Ancora una volta, piastrinarli su agar con livelli di antibiotici più elevati per segregare i trasformanti.

Visualizzare l'espressione della GFP al microscopio a fluorescenza per confermare il successo della t