Motilità di scorrimento nei filamenti di Phormidium lacuna

Inizia con una coltura di filamenti di Phormidium lacuna .

Omogeneizzare brevemente la coltura per rompere i cluster di filamenti e generare una sospensione uniforme.

Trasferire il campione omogeneizzato in una piastra di Petri e lasciarlo riposare.

Coprire la piastra con cellophane per ridurre l'evaporazione.

Posizionare un vetrino sul tavolino del microscopio che funga da piattaforma di supporto.

Posizionare la piastra contenente il campione direttamente sopra il vetrino.

Utilizzare un obiettivo a bassa potenza e mettere a fuoco i filamenti batterici sospesi nel mezzo per osservarne il movimento.

I filamenti mostrano un movimento lento e scorrevole attraverso la superficie, guidato dal tipo IV pili, le fibre microscopiche assemblate nella membrana interna ed emergono attraverso la membrana esterna.

Queste fibre si estendono e si ritraggono per tirare le cellule in avanti, permettendo loro di scivolare.

Questo test rivela la caratteristica motilità di scivolamento di Phormidium lacuna in un ambiente liquido.

Coltivare P. lacuna in F2 medio sotto 50 RPM agitazione orizzontale in luce bianca per circa cinque giorni fino a quando la densità ottica stimata a 750 nanometri diventa 0,35. Conservare il campione a quattro gradi Celsius. Omogeneizzare i filamenti con gli ultrasuoni per un minuto alla massima potenza e ciclo di uno.

Misurare la densità ottica a 750 nanometri e trasferire otto millilitri del mezzo contenente P. lacuna in una capsula di Petri di sei centimetri. Attendere qualche minuto fino a quando il campione raggiunge la temperatura ambiente, quindi coprire la capsula di Petri con un foglio di cellophane. Posizionare un vetrino da microscopio sul tavolo X-Y di un microscopio standard con fotocamera.

Accendere la luce del microscopio e spostare un obiettivo 4X o 10X nel percorso della luce. Quindi, posizionare la capsula di Petri sopra il vetrino. Regolare i singoli filamenti o i fasci di filamenti in base ai movimenti X, Y e Z della tabella.

Osserva i movimenti di singoli filamenti o fasci e registra i movimenti con una normale fotocamera per microscopio. Assicurarsi che la lente dell'obiettivo non tocchi il liquido.