Misure del flusso di ossigeno per valutare la respirazione mitocondriale in cellule viventi e permeabilizzate

Caricare una sospensione di cellule di mammifero in camere respirometriche contenenti terreni e sigillarle con tappi per creare un sistema chiuso per la misurazione dell'ossigeno.

Un sensore all'interno di ciascuna camera misura in tempo reale il flusso di ossigeno, il tasso di consumo di ossigeno cellulare.

Iniettare la digitonina attraverso i tappi per permeabilizzare le membrane cellulari, consentendo ai componenti citosolici di diffondersi.

Ciò riduce la disponibilità di substrato per la catena di trasporto degli elettroni mitocondriali, abbassando il flusso di ossigeno.

Introdurre piruvato e malato, che entrano nei mitocondri e generano trasportatori di elettroni.

Questi vettori donano elettroni ai complessi I e II dell'ETC, avviando il trasferimento di elettroni e aumentando il flusso di ossigeno.

Iniettare ADP per avviare la sintesi di ATP, che aumenta ulteriormente il flusso di ossigeno.

Successivamente, titolare un disaccoppiatore in modo graduale per interrompere il gradiente di protoni, massimizzando il flusso di ossigeno.

Infine, iniettare l'antimicina A per inibire il Complesso III, arrestando il trasporto di elettroni e riducendo al minimo il flusso di ossigeno.

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