Estrazione di batteri apoplastici utilizzando un metodo di pressione a base di siringa

Prendi una pianta di Arabidopsis con foglie pre-inoculate con batteri per studiare le interazioni pianta-microbio.

Questi batteri proliferano nell'apoplasto, lo spazio intercellulare tra le cellule vegetali, formando microcolonie.

Una volta stabilita la colonizzazione apoplastica, si estraggono le foglie e si inseriscono in una siringa senza ago.

Aggiungi acqua distillata per coprire il tessuto.

Inserisci lo sturalavandini, tieni la siringa in posizione verticale, battila e regola lo sturalavandini per liberare l'aria intrappolata.

Sigilla la punta con parafilm per creare una camera chiusa per l'estrazione dell'apoplasto.

Applicare pressione positiva spingendo lo stantuffo finché il tessuto non diventa scuro, indicando compressione e ingresso d'acqua negli spazi intercellulari per spostare i batteri.

Successivamente, applica pressione negativa tirando lo sturalavandini per espandere la matrice tissutale e aspirare liquidi e batteri.

Ripeti i cicli di pressione per generare forze di taglio che interrompono le microcolonie, rilasciando batteri senza danneggiare il tessuto vegetale.

Sblocca la siringa e raccogli il liquido apoplastico contenente batteri dispersi per un'analisi più approfondita