JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:28 min. • November 28th, 2025
Prendi una pianta di Arabidopsis con foglie pre-inoculate con batteri per studiare le interazioni pianta-microbio.
Questi batteri proliferano nell'apoplasto, lo spazio intercellulare tra le cellule vegetali, formando microcolonie.
Una volta stabilita la colonizzazione apoplastica, si estraggono le foglie e si inseriscono in una siringa senza ago.
Aggiungi acqua distillata per coprire il tessuto.
Inserisci lo sturalavandini, tieni la siringa in posizione verticale, battila e regola lo sturalavandini per liberare l'aria intrappolata.
Sigilla la punta con parafilm per creare una camera chiusa per l'estrazione dell'apoplasto.
Applicare pressione positiva spingendo lo stantuffo finché il tessuto non diventa scuro, indicando compressione e ingresso d'acqua negli spazi intercellulari per spostare i batteri.
Successivamente, applica pressione negativa tirando lo sturalavandini per espandere la matrice tissutale e aspirare liquidi e batteri.
Ripeti i cicli di pressione per generare forze di taglio che interrompono le microcolonie, rilasciando batteri senza danneggiare il tessuto vegetale.
Sblocca la siringa e raccogli il liquido apoplastico contenente batteri dispersi per un'analisi più approfondita.
Quattro giorni dopo l'inoculazione, si taglia o la parte aerea della pianta di Arabidopsis o la foglia inoculata della pianta di fagioli e si inserisce in una siringa da 20 millilitri senza ago.
Per le foglie di fagiolo, arrotola la foglia su se stessa, lasciando la faccia abassiale verso l'esterno. Aggiungi abbastanza acqua distillata da coprire il tessuto di soffitto. Successivamente, inserire lo sturalavandini che tiene la siringa in posizione verticale e rimuovere l'eccesso di aria e bolle d'aria all'interno della siringa toccando delicatamente la canna finché tutta l'aria non si trova vicino alla punta e, dopo aver rimosso l'aria, copri la punta della canna della siringa con un film di paraffina.
Ora premi con attenzione lo sturalavandini per generare pressione positiva finché il tessuto non diventa più scuro. Poi, tira lo sturalavandini per generare pressione negativa. Rimuovere la pellicola di paraffina e lo sturalavandini e raccogliere il liquido contenente i batteri estratti dall'apoplasto.