Preparazione di pellicole di nanocellulosa batterica provenienti da batteri produttori di cellulosa

Prendi una micropiastra piena di un mezzo nutriente contenente manitolo.

Inoculare ogni pozzo con un batterio produttore di cellulosa e incubare in condizioni statiche.

Durante l'incubazione, i batteri prendono mannitolo e lo metabolizzano in glucosio.

Questo glucosio viene trasportato nei complessi di cellulosa sintasi incorporati nella membrana batterica e polimerizza in catene di glucani.

Queste catene si estrudono nello spazio extracellulare, dove cristallizzano in microfibrille.

Le microfibrille si raggruppano in strutture simili a nastro, formando una matrice di nanocellulosa tridimensionale.

Man mano che si produce più nanocellulosa, questa si accumula all'interfaccia aria-liquido, ispessendosi in pellicole gelatinose modellate nella forma del pozzo.

Preleva le pellicole e incubale in una soluzione alcalina per lisare le cellule batteriche, poi rimuovi il terreno residuo.

Risciacqua ripetutamente le pellicole con acqua per eliminare eventuali residui di soluzione alcalina. Conserva le pellicole in acqua per prevenire la disidratazione. Poi, sterilizzarli a vapore per garantirne la sterilità per applicazioni successive.

Trasferire due millilitri del mezzo di coltura liquida in ciascun pozzetto di una piastra di coltura tissutale da 24 pozzi. Prendere due colonie con un ago inoculante dalle piastre di Petri inoculate in passo e posizionarle nel primo pozzo della piastra di coltura tissutale. Ripeti la stessa procedura per i restanti 23 pozzi.

Incubare la piastra di coltura tissutale a 30 gradi Celsius per sette giorni. Questo produrrà un totale di 24 pellicole BNC con un diametro di 16 mm e uno spessore di circa 2-3 mm. Raccogli le pellicole BNC dal mezzo di crescita e sterilizzale in 200 millilitri di soluzione di idrossido di sodio all'uno percento per un'ora a 50 gradi Celsius per rimuovere tutte le tracce di G. xylinus.

Scartare la soluzione e aggiungere 200 millilitri di soluzione fresca di idrossido di sodio a un percento di preparazione. Ripeti lo stesso processo ancora una volta o finché le pellicole BNC in soluzione acquisiranno un aspetto traslucido. Risciacqua le pellicole BNC con acqua tre volte e conservale in acqua ad alta purezza a temperatura ambiente.

Assicurati che le pellicole BNC siano completamente immerse nell'acqua e non possano mai asciugarsi. Poi, autoclave le pellicole BNC a 121 gradi Celsius per 20 minuti.