Isolamento di endospore da un campione ambientale tramite lisi mirata di cellule vegetali

Prelevate un campione ambientale contenente cellule vegetali ed endospore di un batterio formatore di endospore, insieme ad altri batteri.

Le endospore hanno un mantello protettivo che le aiuta a sopravvivere in condizioni avverse.

Utilizzando un'unità di filtrazione a vuoto, filtra il campione per intrappolare cellule e endospore su una membrana.

Metti la membrana in una ciotola e tagliala in piccoli pezzi.

Trasferisci i pezzi in un tubo, aggiungi un tampone e agita il tubo per liberare cellule e endospore.

Incubare con agitazione ad alta temperatura per indebolire le strutture cellulari vegetali senza danneggiare le endospore.

Raffreddare il campione, poi aggiungere il lisozima e incubare con agitazione. Il lisozima interrompe la parete cellulare delle cellule vegetative, provocandone la rottura.

Aggiungi idrossido di sodio e un detersivo, e incuba per degradare le macromolecole cellulari e i detriti preservando le endospore resistenti.

Filtra il campione per isolare le endospore. Lava le endospore per rimuovere i reagenti in eccesso, preparandoli per ulteriori analisi.

Una volta che l'unità di filtrazione e la pompa a vuoto sono state preparate secondo il protocollo testuale, si utilizza