JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 1:59 min. • November 28th, 2025
Si inizia con colture notturne di ceppi di Vibrio cholerae , batteri patogeni coltivati in un ambiente ricco di nutrienti.
Centrifuga le colture per pelletare le cellule. Rimuovere il sovrantantante contenente composti extracellulari e risospendere il pellet nella soluzione salina.
Successivamente, immergi un inoculatore sterile a filo nella coltura e lo infila verticalmente nell'agar di motilità per depositare i batteri sotto la superficie senza diffusione laterale.
Sterilizza l'inoculatore a fiamma tra un ceppo e l'altro per prevenire la contaminazione incrociata.
Incubare la piastra per permettere ai batteri di migrare attraverso l'agar di motilità.
L'agar contiene cloruro di trifeniltetrazolio, o TTC, un indicatore redox che diventa rosso alla riduzione da parte delle cellule metabolicamente attive.
Le ceppi mobili riducono la TTC su un'ampia area, formando una grande zona rossa, mentre le ceppi non mobili mostrano colorazioni confinate alla linea di stab.
La dimensione e la diffusione delle zone rosse indicano la motilità di ciascun ceppo.
Lava la pellet cellulare ottenuta da coltura notturna. Inoculare le placche di agar di motilità inserendo una pugnalata inoculante nella coltura liquida lavata e infilare verticalmente nel mezzo.
Assicurati che la pungente che inoculare non si pieghi mentre si punge l'agar. Tra un'inoculazione e l'altra, sterilizza il filo con un bruciatore Bunsen. Incubare le piastre con il copar verso l'alto per 14-24 ore a 37 gradi Celsius.
Dopo 14 ore, monitorare attentamente le placche di motilità per prevenire la crescita eccessiva delle colture.