JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:27 min. • November 28th, 2025
Prendiamo colture separate di Vibrio cholerae, un batterio patogeno, contenente tre diversi biotipi: il classico, il tipo selvatico El Tor e la variante El Tor, ciascuno rappresentante sottogruppi geneticamente distinti.
Inoculare ogni coltura in tubi riempiti con un mezzo specializzato per eseguire il saggio Voges-Proskauer (VP).
Incubare con scuotimento per facilitare la proliferazione batterica.
Il tipo selvatico El Tor fermenta glucosio nel mezzo e produce acetoina, mentre i biotipi classici e varianti no.
Successivamente, aggiungi α-naftolo e idrossido di potassio a ogni sonda, mescola accuratamente e incuba.
In presenza di idrossido di potassio, l'ossigeno atmosferico catalizza l'ossidazione dell'acetoina in diacetile.
Il diacetile reagisce con composti contenenti gruppi guanidina nel mezzo per formare un prodotto di colore rosa-rosso, la cui intensità è aumentata dal α-naftolo.
Lo sviluppo del colore indica una reazione positiva di VP, caratteristica del biotipo selvatico El Tor, mentre i biotipi classici e varianti non mostrano formazione di colore.
Inoculare 4 millilitri di brodo Methyl Red Voges-Proskauer o MR-VP pipettando 10 microlitri di coltura precedentemente preparata durante la notte in 4 millilitri di brodo MR-VP in un tubo di coltura sterile e incubare con aerazione in un incubatore shaker a 225 giri/min per 12-16 ore a 37 gradi Celsius. Successivamente, aggiungere 150 microlitri al 5% per volume di Alfa-naftolo e 50 microlitri di idrossido di potassio al 40% per volume a 1 millilitro di aliquote della coltura notturna MR-VP in tubi di coltura sterili, rispettivamente.
Poi, un breve vortice nei tubi. Lascia i tubi a temperatura ambiente fino a quattro ore finché non si sviluppa un cambiamento di colore.