JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:48 min. • November 28th, 2025
Prendere un mix master contenente una DNA polimerasi che sloca il filo, nucleotidi e un colorante a doppio filamento per l'amplificazione isotermica mediata da loop o LAMP.
Aggiungi primer che contengano una sequenza complementare inversa specifica del gene batterico bersaglio.
Distribuisci il master mix nei tube.
Aggiungi campioni contenenti modelli di DNA batterico ai tubi.
Metti i tubi all'interno di uno strumento LAMP.
La denaturazione iniziale permette al primer di legarsi al DNA bersaglio.
Quando la DNA polimerasi che sposta il filamento inizia a sintetizzare un nuovo filamento, essa sposta il filamento esistente, eliminando la necessità di cicli termici.
Il prodotto amplificato forma una struttura ad anello dovuta all'accoppiamento inverso-complementare.
Questa struttura contiene più siti di partenza per il ciclo successivo, facilitando l'amplificazione esponenziale del DNA bersaglio.
Il colorante si lega al DNA amplificato ed emette fluorescenza.
Monitorare la fluorescenza in tempo reale per rilevare la presenza del gene batterico bersaglio nei campioni.
Separati fisicamente le aree utilizzate per preparare il LAMP Master Mix e aggiungere i template di DNA.
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