Distribuzione tramite elettroporazione di biomolecole fluorescenti nelle cellule batteriche
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 4:55 min. • November 28th, 2025
Si inizia con una cuvetta raffreddata contenente una sospensione di cellule batteriche elettrocompetenti, che hanno una maggiore suscettibilità alla permeabilizzazione della membrana.
La sospensione contiene anche biomolecole marcate con fluorofori organici.
Applicare un impulso elettrico ad alta tensione per creare pori temporanei di membrana, permettendo l'ingresso della biomolecola nel citoplasma.
Aggiungi un mezzo ricco di nutrienti e trasferisci le cellule in un tubo. Incubare per favorire la riparazione della membrana.
Centrifugare le cellule, poi scartare il sovrantantante contenente biomolecole non internalizzate.
Risospendere le cellule in un tampone ad alto contenuto di sale contenente un detergente per staccare le biomolecole aderite alla superficie.
Centrifuga di nuovo, scarta il surnatant e risospensa le celle nel buffer.
Trasferire la sospensione su un filtro e una centrifuga per eliminare il flusso attraverso che contiene eventuali biomolecole non internalizzate. Poi, risciacqua le cellule con un tampone nuovo e risospendile.
Monta le celle su un cuscinetto di agarosio e posiziona una copertura. I batteri marcati con fluorescenze sono pronti per la visualizzazione.
Partendo d
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