Preparazione di campioni di Myxococcus xanthus per l'imaging di cellule vive

Inizia con una coltura di Myxococcus xanthus, un batterio del suolo a crescita lenta.

Inoculare una colonia in un mezzo integrato con un antibiotico.

Le cellule sono state progettate per resistere all'antibiotico, assicurando che solo i batteri desiderati sopravvivano.

Trasferire la sospensione in una fiaschetta più grande contenente il mezzo e incubare con scuotimento per favorire una crescita ottimale.

Prendi un coperto montato su un telaio metallico, che fornisce supporto meccanico durante l'imagin.

Dispensa la coltura batterica sopra, poi aggiungi microsfere fluorescenti per servire come punti di riferimento per l'allineamento delle immagini mentre si acquisiscono più immagini.

Posiziona un tappetino di agarosio preriscaldato contenente il substrato, poi sovrapporlo con una copertura per mantenere l'idratazione.

Incubare per permettere alle cellule di aderire al cuscinetto di agarosio.

Il pad fornisce nutrienti alle cellule, consentendo l'imaging a lungo termine delle cellule vive dei processi cellulari durante la proliferazione nel batterio a crescita lenta.

Per cominciare, risospendere una singola colonia di M. xanthus in 500 microlitri di CTT all'1%, integrato con antibiotici, in un