Valutazione del ruolo protettivo di un chaperone attivato da acido nell'E. coli sotto stress acido
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:46 min. • November 28th, 2025
Prendiamo le colture ricombinanti di E. coli sensibili allo stress ambientale.
La coltura di prova trasporta un plasmide che codifica un accompagnatore attivato dall'acido, mentre la coltura di controllo trasporta solo la spina dorsale plasmide.
Inoculare singole colonie in mezzi integrati con antibiotici per garantire la ritenzione dei plasmidi e incubare per favorire la crescita batterica.
Diluire le colture in substrati freschi contenenti l'antibiotico e un induttore per attivare l'espressione del chaperone.
Far crescere le colture fino alla fase centrale logaritmica, poi diluire per ottenere una densità ottica specifica.
Aggiungi acido per abbassare il pH, inducendo stress acido.
Nella coltura di prova, condizioni acide attivano il chaperone, che stabilisce le proteine cellulari e ne impedisce l'aggregazione. Nella coltura di controllo, l'assenza del chaperone provoca la denaturazione e l'aggregazione delle proteine cellulari.
Aggiungi una base per neutralizzare il pH e fermare lo stress acido.
Monitorare la crescita batterica misurando la densità ottica nel tempo.
La crescita aumentata nella coltura di test indica il ruolo protettivo dell'accompagnatore durante lo stress acido.
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