Esposizione di una comunità batterica orale sintetica a fasi simulate della digestione

Inizia con un tubo contenente una comunità batterica sintetica comunemente presente nella bocca umana.

Aggiungi liquido salivari simulato contenente mucina, una glicoproteina e l'enzima α-amilasi per imitare l'ambiente orale, poi incubare con scuotere.

I batteri interagiscono con la mucina, che favorisce l'aggregazione, mentre la α-amilasi replica le condizioni enzimatiche della saliva.

Raccogli un campione.

Successivamente, introdurre liquido gastrico simulato con mucina a pH acido per imitare l'ambiente dello stomaco e incubare con tremori.

Le condizioni acide uccidono le specie batteriche sensibili all'acido, ma sopravvivono le specie batteriche tolleranti agli acidi, rivestite di mucina e leggermente tolleranti all'acido.

Raccogli un altro campione.

Infine, aggiungi liquido intestinale simulato contenente bicarbonato e sali fisiologici. Incuba con lo scuotito.

L'ambiente ricco di sale induce stress ionico, che disturba la membrana batterica e riduce la vitalità.

Raccogli un campione finale.

Tutti e tre i campioni post-simulazione sono ora pronti per la valutazione della vitalità batterica.

Per simulare la digestione orale, trasferire 3 millilitri della comunità batterica in un tubo sterile da 50 millilitri e mescolare con 3 millilitri di liquido salivare simulato o SSF.

Aggiungere 75 unità per millilitro di alfa-amilasi da saliva umana tipo 9A e due grammi per litro di mucina da stomaco suino tipo 2. Incubare la miscela a 37 gradi Celsius e 100 giri al minuto per due minuti. Raccogliere un campione da 2 millilitri per l'estrazione del DNA e la quantificazione della citometria a flusso.

Per simulare la digestione gastrica, aggiungi 4 millilitri di liquido gastrico simulato o SGF a 3 millilitri di batteri. Usa un molare HCl per regolare il pH a 3 se necessario. Incubare il campione a 37 gradi Celsius e 100 giri/min per due minuti.

Poi raccogli un campione da 2 millilitri. Per la digestione dell'intestino tenue, aggiungere 4 millilitri di liquido intestinale simulato o SIF ai batteri. Usa l'idrossido di sodio per regolare il pH se necessario.

Poi incubare il campione a 37 gradi Celsius e 100 giri al minuto per due minuti, e raccogliere un campione da 2 millilitri.