JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 5:43 min. • November 28th, 2025
Prendi una foglia infettata da Candidatus liberibacter, un batterio patogeno.
Taglialo in pezzi, congelalo rapidamente in azoto liquido e macinalo per rompere le cellule vegetali e liberarne il contenuto, compresi i batteri.
Aggiungi un buffer per la lisi dei nuclei e mescola bene.
Incubare ad alta temperatura per lisare le membrane, rilasciando DNA genomico dai nuclei delle piante e dalle cellule batteriche.
Aggiungi l'enzima RNasi, inverti il tubo per mescolarlo e incuba per degradare l'RNA.
Aggiungi una soluzione di precipitazione proteica e mescola per favorire l'aggregazione proteica. Centrifugare per pelletare proteine e detriti cellulari.
Trasferire il soprandanante in un tubo contenente isopropanolo e mescolarlo per precipitare il DNA in filamenti visibili. Centrifuga per pelletare il DNA.
Lava il pellet con etanolo per rimuovere le impurità, asciuga all'aria e reidrata il DNA.
Incubare ad alta temperatura per solubilizzare il DNA, poi caricare un campione in una microcuvetta.
Utilizzando uno spettrofotometro, misura la concentrazione di DNA isolato.
Per prima cosa, usa forbici pulite per tagliare una foglia fresca intera da un albero di agrumi e mettila in un sacchetto di plastica p
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