Test di sovrapposizione sull'agar morbido per rilevare l'uccisione mediata da batteriocina in Pseudomonas syringae
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 3:17 min. • November 28th, 2025
Inizia con un agar morbido fuso mantenuto a temperatura calda.
Inoculare una coltura di Pseudomonas syringae , il ceppo test, nell'agar.
Poi vortice brevemente per distribuire le cellule in modo uniforme.
Versa il composto su una piastra di agar solidificata e spargila uniformemente.
Chiudi il coperchio e lascia che si solidifichi.
Individua un soprandanante filtrato sulla superficie dell'agar solidificato.
Il soprantantante contiene batteriocina, una molecola antibatterica derivata da un ceppo di donatore indotto dallo stress , P. syringae .
Incubare la piastra per permettere la crescita batterica e la diffusione della batteriocina attraverso l'agar.
La batteriocina si lega a specifici recettori superficiali del ceppo di prova e ne interrompe la membrana, causando la morte cellulare.
Questo porta alla formazione di una zona libera sull'agar, che indica l'area in cui il ceppo di prova è stato ucciso dalla molecola antibatterica batteriocina.
Diluire la coltura da 1 a 100 in KB freschi. Incubare la coltura per tre o quattro ore agitandola a temperatura ambiente. Successivamente, prepara agar acquoso sterilizzato autoclavando una sospensione di agar in acqua ultra-pura.
Mantieni l'agar morbido
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