Isolamento dei batteri adattati allo stress tramite selezione di una singola colonia

Prendi una coltura batterica che è stata coltivata in condizioni di stress per un periodo prolungato.

Lo stress a lungo termine provoca mutazioni spontanee, selezione naturale e proliferazione di batteri adattati allo stress.

Per isolare questi batteri, si applica un piccolo volume della coltura su una piastra di agar contenente lo stesso fattore di stress e si incuba.

Lo stressore garantisce la crescita solo di colonie batteriche adattate allo stress.

Scegli una singola colonia per mantenere la purezza genetica e inocula il substrato liquido con lo stressore.

Incubare con scuotimento per facilitare la crescita di batteri adattati allo stress.

Usa un piccolo volume di coltura per inoculare il substrato fresco con lo stressore.

Contemporaneamente, inoculare un altro mezzo contenente lo stressore con batteri di tipo selvatico o non adattati allo stress.

Misura l'assorbanza a intervalli regolari come indicatore della crescita batterica.

Confrontare il profilo di crescita per garantire un isolamento efficace dei batteri adattati allo stress.

Preparare un mezzo a piastre agar all'1,6% contenente lo stesso stressore alla stessa concentrazione del mezzo. Impallina 0,1 millilitri della coltura di uscita dal chemostato e incuba a 37 gradi Celsius per 16 ore. Dopo l'incubazione, si prelevano singole colonie dalla piastra usando uno stuzzicadenti sterile e si inoculano in provette da 15 millilitri contenenti lo stesso fattore di stress e alla stessa concentrazione media del chemostato.

Incubare per sei ore. Trasferire un millilitro del brodo di coltura in una fiaschetta Erlenmeyer da 250 millilitri contenente 50 millilitri di substrato. Raccoglie 0,5 millilitri del brodo di coltura ogni ora e misura la densità ottica a 600 nanometri.

Confrontare il tasso di crescita della deformazione adattata con quello della deformazione di tipo selvatico dato il fattore di stress