JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 3:07 min. • November 28th, 2025
Inizia con un campione di acqua di mare contenente diverse comunità microbiche, inclusi batteri capaci di degradare gli idrocarburi.
Esegui diluizioni seriali del campione in soluzione salina per ridurre la densità microbica.
Aggiungere il petrolio greggio ad acqua distillata sterile e agitare la miscela per solubilizzare parzialmente i componenti idrocarburici del petrolio.
Lascia sedimentare la miscela, separandola in frazioni oleose solubili in acqua e insolubili in acqua.
Prepara piastre di agar selettive utilizzando ogni frazione di olio come unica fonte di carbonio per arricchire batteri che degradano idrocarburi solubili o idrofobici.
Impiatta i campioni di acqua di mare diluita sul mezzo selettivo e incuba a temperatura ambiente.
Le colonie che emergono si basano su enzimi come idrossilasi e diossigenasi per metabolizzare gli idrocarburi.
Scegli colonie morfologicamente distinte e rimettile su mezzi freschi contenenti la stessa frazione di olio per ottenere colture pure di batteri degradanti dagli idrocarburi.
Questo metodo consente l'isolamento selettivo dei batteri marini degradanti del petrolio.
Per preparare un mezzo minimo contenente una frazione solubile olio-acqua e una frazione insolubile olio-acqua come unica fonte di carbonio, si aggiungono l'1-2% di petrolio greggio a 500 millilitri di acqua distillata sterile in una fiaschetta filtrante con una valvola sul fondo. Mantieni la fiaschetta sotto agitazione costante a 24-28 gradi Celsius a 150 volte g per 48 ore. Dopodiché, posiziona la fiaschetta su una superficie stabile e attendi 10-20 minuti per permettere alla frazione solubile e insolubile di separarsi.
Poi apri la fiaschetta inferiore del filtro per trasferire la frazione solubile in olio-acqua in una nuova fiaschetta sterile, risparmiando la frazione insolubile olio-acqua. Poi prepara due bottiglie di medium Bushnell Haas con minimo agar medium. Autoclava.
Combinato con la frazione solubile olio-acqua come unica fonte di carbonio per produrre 500 millilitri di mezzo agarico. Fai lo stesso con la frazione insolubile olio-acqua e trasferisci circa 25 millilitri di ciascun mezzo su singole piastre di Petri. Per isolare i batteri degradanti del petrolio, riutilizzare campioni precedentemente diluiti e pipettare 100 microlitri di ciascuna diluizione sulle piastre di Petri contenenti il mezzo agar e impiattarle.
Ricorda di tenere i controlli negativi per le tue piatte. Incubare i piatti per uno o tre giorni alla temperatura desiderata e ripetere le procedure di isolamento come in precedenza.