Trasfezione di un sistema di espressione genica induttibile in cellule che esprimono una proteina effettore batterica

Fai un test sulle cellule umane che esprimono CaeB, una proteina batterica anti-apoptotica.

Usa celle prive di CaeB come controllo.

Introdurre un reagente di trasfezione complesso con un sistema di espressione genica indottibile dalla tetraciclina contenente sia plasmidi regolatori che di risposta.

Il plasmide regolatore codifica un attivatore e silenziatore trascrizionale, mentre il plasmide di risposta codifica una proteina pro-apoptotica controllata da TRE.

Incubare le cellule per facilitare l'assorbimento dei plasmidi e l'espressione proteica regolare.

Senza tetraciclina, l'attivatore rimane inattivo e il silenziatore reprime la trascrizione guidata da TRE.

Aggiungi un analogo della tetraciclina e incuba.

L'analogo consente il legame attivatore–TRE, che avvia l'espressione proteica pro-apoptotica.

Nelle cellule di controllo, questo attiva una segnalazione apoptotica, attivando un marcatore apoptotico.

Nelle cellule che esprimono CaeB, CaeB inibisce la segnalazione apoptotica, riducendo l'attivazione dei marcatori.

Una riduzione dell'attivazione dei marcatori nelle cellule che esprimono CaeB suggerisce che CaeB inibisca l'apoptosi.

Inizia questa procedura seminando cellule HEK293 che espri