Monitoraggio continuo del rumore biologico nei batteri tramite microscopia a tempo indeterminato

Inizia con una piastra di coltura contenente batteri inseriti sotto un gel pad di agarosio per immobilizzare i batteri e sostenere la crescita del monostrato.

I batteri esprimono costitutivamente proteine fluorescenti verdi, consentendo un monitoraggio in tempo reale dell'espressione genica.

Versa ulteriore gel di agarosio intorno al tampone per sigillare il campione e lascialo solidificare a temperatura ambiente.

Sigilla la piastra con del nastro, perforala per permettere lo scambio di gas e invertisci per evitare la condensa.

Incubare la piastra a bassa temperatura per stabilizzare il gel e prevenire la divisione batterica.

Successivamente, applica olio a immersione sull'obiettivo e posiziona la piastra su un palco confocale del microscopio.

Avvia l'imaging time-lapse.

Man mano che la GFP matura gradualmente, inizia a fluorescere. Durante la divisione cellulare, queste proteine fluorescenti vengono distribuite tra le cellule figlie, causando un calo dell'intensità di fluorescenza.

Questo crea un pattern di fluorescenza a denti serrati, e le differenze in questo schema tra cellule geneticamente identiche nello stesso ambiente mostrano rumore biologico nell'espressione genica.

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