Un approccio basato sulla cromatografia liquida e la spettrometria di massa per l'analisi dei metaboliti di S. aureus

Si inizia con Staphylococcus aureus sospeso in una soluzione di tempra contenente perle di silice, conservate a bassa temperatura per preservarne lo stato metabolico.

Omogeneizzare i batteri in condizioni fredde per liberare contenuti intracellulari minimizzando la degradazione enzimatica dei metaboliti.

Centrifuga il lisato e raccoglie il soprandantato ricco di metaboliti.

Aggiungere un solvente organico all'estratto e al vortice per precipitare macromolecole da metaboliti solubili.

Centrifuga per mettere in pellet il precipitato e trasferire il soprantantante nelle fiale.

Carica le fiale in un sistema di cromatografia liquida-spettrometria di massa.

All'interno della colonna cromatografia, i metaboliti interagiscono con la fase solida e stazionaria in base alle loro proprietà chimiche.

Aggiungi un tampone per eluire i metaboliti. Successivamente, si dirigono i metaboliti nella sorgente di ionizzazione elettrospray dello spettrometro di massa per ionizzarli.

Gli ioni vengono poi separati in base al loro rapporto massa-carica.

I dati risultanti vengono confrontati con un database di riferimento per identificare i metaboliti.

Per iniziare l'estrazione dei metaboliti, prima scongelare i campio