JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:51 min • November 28th, 2025
Prendiamo la coltura di un batterio geneticamente modificato progettato per ospitare un plasmide che esprime una proteina fluorescente secretoria e conferisce resistenza agli antibiotici.
Inoculalo in un mezzo contenente l'antibiotico e incubarlo con agitazioni per favorire la crescita batterica.
L'antibiotico garantisce che solo le cellule che trattengono il plasmide possano proliferare.
Una volta che la coltura raggiunge la densità desiderata, trasferirla a un sistema automatizzato di gestione dei liquidi.
Una piastra a pozzo profondo contiene concentrazioni variabili di nutrienti essenziali, che vengono dispensati in una piastra microtitolata per creare formulazioni di mezzo distinte.
Inocula ogni pozzetto della piastra con la coltura batterica.
Sigilla la piastra e mettila in un microbioreatore, che mantiene una temperatura e un'aerazione uniformi.
Le diverse formulazioni portano a variazioni nella crescita batterica e nella secrezione di proteine fluorescenti.
Un sensore ottico nel dispositivo misura la densità e la fluorescenza cellulare, permettendo il confronto tra la crescita batterica e la produzione di proteine fluorescenti tra le formulazioni dei mezzi.
Sterilizza le piastre a pozzo profondo per lo stoccaggio della soluzione di stoccaggio su un tavolo di lavoro pulendo le lastre con il 70% di etanolo e successivamente asciugandole in una cappa a flusso laminare. Inizia la coltura dei semi inoculando 50 millilitri di mezzo BHI contenente 25 milligrammi per litro di kanamicina con un'aliquota proveniente dalla banca cellulare funzionante. Posiziona tutta la tessera di laboratorio necessaria sul tavolo da lavoro robotico e versa le soluzioni di stocco nelle relative attrezzature.
Poi, avvia il flusso di lavoro robotico per la preparazione del substrato, così che l'ultimo passaggio, ovvero l'inoculazione, venga raggiunto in tempo per l'inizio della coltura dei semi. Campiona la coltura dei semi dopo circa due ore per monitorare la crescita misurando la densità ottica a 600 nanometri o OD600. Continua a monitorare la crescita ogni ora.
Dopo circa cinque ore, la coltura raggiunge un OD600 tra tre e quattro, e viene utilizzata per inoculare le colture principali. Posiziona la coltura dei semi sul tavolo di lavoro del maneggiatore dei liquidi e continua il protocollo di preparazione del materiale. Sigilla le piastre microtitolate di coltivazione dopo l'inoculazione.
Successivamente, inserisci il MTP sigillato per la coltivazione nel dispositivo Biolector. Poi, avvia il protocollo di coltivazione predefinito.