JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:35 min • November 28th, 2025
Inizia inoculando un anello di un ceppo cianobatterico su un mezzo di crescita. Incubare per permettere alle cellule di crescere fino alla densità desiderata.
Lavare le cellule centrifugandole e scartare il soprantantante contenente metaboliti residui e detriti.
Risospendi il pellet in un piccolo volume di mezzo di crescita per creare una sospensione concentrata.
Mescola un'aliquota di questa sospensione con glicerolo, un crioprotettore che stabilisce la membrana e previene la formazione di cristalli di ghiaccio durante il congelamento.
A un'altra aliquota, aggiungere il dimetilsolfosdo, un crioprotettore che penetra nelle cellule e inibisce la nucleazione del ghiaccio.
Conservare i campioni a basse temperature, dove l'attività metabolica si interrompe e le cellule rimangono vitali per lunghi periodi.
Per rivitalizzare, raschiare una piccola quantità di biomassa congelata su una piastra di agar senza antibiotici e striare per ridurre lo stress e favorire un recupero graduale.
Questo metodo consente la crioconservazione a lungo termine e la rinascita di ceppi cianobatterici per studi futuri.
Per conservare i ceppi a lungo termine, si prepara una nuova coltura del ceppo inoculando un asolo pieno di cellule in 30-50 millilitri di mezzo BG11. Fai crescere la coltura per tre o quattro giorni fino a un OD750 pari a 0,4-0,7.
Dopo aver usato BG11 per lavare le cellule una volta, risospendere il pellet in circa due millilitri di BG11. Aggiungi 0,8 millilitri delle celle concentrate in un tubo. Poi aggiungi 0,2 millilitri di glicerolo sterilizzato all'80%.
A un altro tubo, aggiungi 0,93 millilitri di celle concentrate e 0,07 millilitri di DMSO. Conserva entrambi i tubi a meno 80 gradi Celsius. Per rianimare gli ceppi, rimuovi il tubo e usa uno stuzzicadenti smussato per raschiare alcune cellule su una piastra di agar senza antibiotici. Poi usa un anello sterile per uscire normalmente con la stria.