JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 3:22 min. • January 30th, 2026
Prendiamo globuli rossi di pecora (SRBC) opsonizzati con IgM, con anticorpi IgM legati agli antigeni della superficie cellulare.
Aggiungi siero contenente proteine del complemento tranne C5.
Il complesso C1 si lega agli anticorpi e diventa attivo.
La C1 attivata divide C4 e C2, formando la convertasi C3, che poi divide C3 e deposita C3b sugli SRBC.
Senza C5, C3b si degrada in C3bi.
Aggiungi le SRBC a una coltura di macrofagi.
C3bi si lega al recettore dei macrofagi, scatenando la fagocitosi SRBC.
Aggiungere una soluzione ipotonica per lisare e rimuovere gli SRBC non interiorizzati.
Aggiungi un buffer di lisi per lisare le cellule e rilascia emoglobina SRBC.
Introdurre un reagente di rilevamento.
In presenza di urea, l'emoglobina catalizza l'ossidazione del diaminofluorene da parte del perossido di idrogeno, generando un prodotto colorato.
Misurare l'assorbanza del prodotto colorato, che è proporzionale alle SRBC fagocitate.
Questo saggio modella la fagocitosi di batteri marcati da anticorpi utilizzando SRBC opsonizzati per imitare bersagli batterici.
Per un saggio di opsonizzazione, incubare 2 volte 10 alla 8ª globuli rossi di pecora o SRBC con 50 microlitri di immunoglobulina anti-SRBC M o IgM
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