JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 3:42 min. • January 30th, 2026
Inizia aggiungendo una soluzione contenente sonde batteriche di ibridazione in situ (FISH) specifiche per 16S rRNA su un vetrino contenente le sezioni intestinali del topo colonizzate dai batteri.
Inserire un copertura per distribuire le sonde contenenti liquido e prevenire l'evaporazione.
Incubare il vetrino in una camera umidificata a temperatura elevata.
Questo spiega la struttura secondaria dell'RNA, facilitando l'ibridazione della sonda con sequenze complementari nell'rRNA batterico 16S.
Rimuovere il copricapo e incubare il vetrione in un tampone di lavaggio preriscaldato per rimuovere le sonde non legate.
Risciacqua con un tampone fosfato per mantenere il pH fisiologico.
Applica una controcolorazione contenente un colorante specifico per muco e un colorante nucleare, e incuba.
Questi coloranti si legano selettivamente al muco intestinale e al DNA delle cellule batteriche e dell'ospite. Lava il carrello con un buffer e monta i coperchissi sul slide usando un supporto di montaggio.
Al microscopio confocale, osserva batteri distinti marcati come FISH, cellule intestinali e lo strato muco all'interno delle sezioni.
Crea cerchi molto stretti attorno a ogni sezione di tessuto usando un bloc
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