JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 3:04 min. • January 30th, 2026
Si inizia con una coltura di Legionella pneumophila, un batterio patogeno Gram-negativo che rilascia vescicole della membrana esterna.
Questi OMV trasportano lipopolisaccaridi e proteine di membrana che contribuiscono alla virulenza batterica.
Centrifuga la coltura per pelletare i batteri intatti.
Raccogli gli OMV contenenti il surnatante e centrifuga di nuovo per pelletare i batteri residui.
Filtra il soprandanante attraverso una membrana per rimuovere i batteri rimasti mantenendo gli OMV.
Esegui una seconda filtrazione utilizzando una membrana fresca per rimuovere i detriti batterici.
Raccogli il filtrato senza batteri e ultracentrifugalo per pelletare gli OMV.
Scartare il soprantantante, risospendere il pellet in tampone e fare nuovamente l'ultracentrifuga per rimuovere proteine e lipopolisaccaridi debolmente associati.
Rimuovi il sovrantante e risospezioni gli OMV purificati in buffer.
Striscia un'aliquota degli OMV sulle placche di agar di sangue e BCYE e incuba.
La mancanza di formazione di colonie conferma l'assenza di contaminazione batterica.
Conservare gli OMV a bassa temperatura per gli studi di interazione ospite-patogeno.
Aggiungere la coltura liquida rimanente a 90 millilitri di
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