Isolamento delle cellule epiteliali della vescica del topo contenenti comunità batteriche intracellulari

Inizia con cellule epiteliali della vescica raschiate da una vescica di topo infettata da E. coli uropatogeno marcato con fluorescente.

Durante l'infezione, questi batteri invadono le cellule epiteliali e formano comunità batteriche intracellulari, o IBC—strutture simili a biofilm che li proteggono dalle difese immunitarie dell'ospite.

Al microscopio dissezionante, identificare gli IBC come grandi aggregati fluorescenti confinati all'interno delle singole cellule epiteliali.

Assemblare un sistema di micropipettura a bocca utilizzando un capillare di vetro tirato collegato a una pipetta aspirante per isolare singole cellule epiteliali contenenti IBC.

Immergi brevemente la punta capillare nel PBS per ridurre l'assorbimento di liquidi guidati dai capillari.

Posizionare il capillare vicino alla cellula epiteliale fluorescente selezionata e applicare una dolce aspirazione per attirare una singola cellula contenente IBC, evitando cellule non infette e batteri extracellulari.

Espellere la cellula in un tubo sterile per microcentrifuga usando una leggera pressione positiva, preservando la vitalità batterica.

Questo metodo consente l'isolamento delle cellule epiteliali che ospitano IBC per l'anali