JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 4:02 min. • February 2nd, 2026
Prendiamo l'RNA totale estratto da un cervello di topo infettato da batteri patogeni. L'estratto contiene trascrizioni di geni sensibili all'infezione.
Aggiungi un enzima degradante del DNA e incuba per degradare il DNA genomico residuo.
Aggiungi un master mix contenente enzima trascridasi inversa (RT), nucleotidi e primer aspecifici.
Incubare per sintetizzare DNA complementare (cDNA).
Introduci una temperatura elevata per inattivare l'enzima RT.
Prendi un mix master contenente DNA polimerasi, nucleotide, un colorante a doppio filamento che lega il DNA e primer specifici per un gene bersaglio.
Aggiungi il cDNA e applica calore per denaturare il DNA.
L'innesco si lega al cDNA bersaglio, permettendo la sintesi di nuovi filamenti di DNA.
Il ciclo viene ripetuto per amplificare il gene bersaglio.
Il colorante si lega al DNA amplificato ed emette fluorescenza, che viene registrata alla fine di ogni ciclo.
L'aumento della fluorescenza conferma l'espressione del gene reattivo all'infezione nel cervello infetto del topo.
Infettare tutti i topi che utilizzano cellule planctoniche o cellule dello stato biofilm ed eseguire l'eutanasia come descritto nel protocollo testuale. Successivamente, estrai l'RNA
Visualizza la trascrizione completa e accedi a migliaia di video scientifici