JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:55 min • February 2nd, 2026
Inizia con una scorta congelata di Mycobacterium tuberculosis, un batterio patogeno che causa la tubercolosi polmonare.
Scongela la fiala e mescola delicatamente la sospensione per disperdere i grumi batterici e garantire una concentrazione uniforme.
Diluire il volume richiesto in un tampone sterile per preparare un inoculo aerosol standardizzato.
Immobilizza un topo in un portamesh per limitare i movimenti e mettilo all'interno della camera di esposizione dell'aerosol sigillata.
Carica l'inoculo preparato in una siringa e iniettalo nell'unità nebulizzatore collegata alla camera.
Attiva il sistema di inalazione, che utilizza aria compressa per nebulizzare la sospensione in gocce fini e respirabili.
Queste gocce, contenenti M. tuberculosis viabile, si disperdono nell'aria della camera.
Il topo cosciente inala l'aerosol, permettendo ai batteri vivaci di penetrare in profondità nei polmoni e di innescare l'infezione.
Il modello murino della tubercolosi polmonare è ora pronto per ulteriori studi.
Inizia riscaldando le scorte di Mycobacterium tuberculosis di un titolo CFU noto. Quando le cellule si sono scongelate, si utilizza una siringa da 1 millilitro dotata di ago calibro 27 per mescolare con cura la sospensione cinque volte e disperdere i grumi batterici, evitando la produzione di aerosol. A seconda della dose di infezione desiderata, trasferire il volume richiesto del stock micobatterico in un tubo da 50 millilitri contenente PBS sterile fino a un volume finale di 6 millilitri. Successivamente, posiziona gli animali sperimentali singolarmente in cesti a rete compartimentati. Posiziona i cestini nella camera circolare dell'aerosol e chiudi il coperchio della camera.
Collega l'unità nebulizzatore Venturi ai tre giunti in acciaio inossidabile. Aspirare la sospensione micobatterica in una siringa da 10 millilitri, dotata di un ago smussato calibro 18, e portare la siringa alla camera aerosol in una scatola di trasporto chiusa. Ora rimuovi il tappo a vite del nebulizzatore e inietta con cura la sospensione di micobatteri nell'unità, facendo attenzione a evitare la generazione di aerosol.
Getta la siringa in un contenitore per oggetti taglienti contenente il 2% di Buraton, poi sigilla il nebulizzatore.
Fai partire l'apparato di inalazione.
Quando il ciclo è terminato, confermare che la sospensione dei micobatteri sia stata completamente nebulizzata.