JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:02 min. • February 2nd, 2026
Prendiamo un topo anestetizzato con incisioni cutanee infettate da un batterio patogeno.
Il batterio è geneticamente ingegnerizzato per trasportare un plasmide contenente il sistema di segnalazione luxABCDE , che consente una bioluminescenza autonoma.
Posiziona il topo in posizione prona sulla piattaforma di imaging bioluminescenze.
Nel sito di infezione, i geni luxA e luxB del batterio codificano per l'enzima luciferasi, mentre i geni luxCDE codificano enzimi che sintetizzano aldeidi grasse a catena lunga, che fungono da substrato per la luciferasi.
In presenza di ossigeno, la luciferasi catalizza l'ossidazione del suo cofattore, il mononucleotide ridotto della flavina, che poi reagisce con l'aldeide grassa a catena lunga, producendo luce blu-verde.
Questa bioluminescenza indica la presenza di batteri metabolicamente attivi nel sito dell'infezione.
Utilizzando il sistema di imaging, si può visualizzare il sito di infezione e quantificare l'intensità del segnale di bioluminescenza.
Per l'imaging in vivo delle ferite infette, si seguono i protocolli di contenimento di livello di biosicurezza due per il trasporto dei topi da e verso lo strumento di imaging e posizionare il topo anestetizzat
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