Isolamento dei batteri dal centro intestinale della zanzara

Inizia con un vetrino contenente una zanzara adulta anestetizzata in una goccia di soluzione salina tamponata con fosfato o PBS.

Al microscopio dissezionale, rimuovere le zampe, le ali e la testa della zanzara.

Taglia la punta dell'addome per evitare di danneggiare il tratto digestivo.

Fissa il torace e l'estremità dell'addome, poi estrai delicatamente il tratto digestivo per estrarlo.

Il tratto digestivo estratto include il mediointestino, responsabile della digestione e ospita diversi batteri intestinali che influenzano la fisiologia delle zanzare.

Con ingrandimenti maggiori, rimuovere con attenzione le strutture circostanti per isolare il intestino medio.

Trasferire l'intestino medio isolato in un tubo fresco contenente PBS.

Omogeneizzare il centro intestinale per liberare i batteri nel PBS.

Distribuisci l'omogeneato diluito su una piastra di agar nutriente.

Incubare la piastra per permettere la crescita delle colonie batteriche, che rappresentano la flora microbica del centro intestinale della zanzara.

Disseziona la zanzara separatamente su un vetrino di vetro sterile contenente una goccia di PBS. Rimuovere con attenzione le zampe, le ali e la testa della zanzara usando una pinza.

Clampa il petto della zanzara e l'ultima sezione dell'addome con una pinza e separala per isolare il tratto digestivo.

Usa le pinze per rimuovere il raccolto e il tubo di Malpighi dal tratto digestivo. La coltura è posizionata nella parte anteriore del mediointestino e si gonfia dopo aver ingerito acqua zuccherata. I tubi di Malpighi sono un gruppo di sottili tubi escretori situati all'incrocio tra intestino medio e intestino posteriore.

Metti il mestello dissezionato in un tubo EP con 200 microlitri sterile PBS buffer e macinalo con il pestello sterile nella panchina super pulita. Diluire serialmente l'omogeneato in tre diluizioni da 10 volte a 50 microlitri di ciascuna diluizione verso la piastra agar LB e poi diffondere la piastra di agar.

Incubare la piastra a 37 gradi per uno o due giorni finché non sono visibili colonie singole.