Imaging dal vivo della morte cellulare dei macrofagi durante un'infezione micobatterica negli embrioni di pesce zebra

Si inizia con embrioni transgenici di pesce zebra che esprimono macrofagi marcati fluorescenti, montati in agarosio a bassa fusione in un piatto di imaging.

Questi embrioni vengono infettati da Mycobacterium marinum marcato fluorescente tramite microiniezione intramuscolare nel mesencefalo, dando origine a una risposta immunitaria localizzata.

Coprire l'agarosio solidificato con substrati embrionali contenenti farmaci anestetici per mantenere l'anestesia e inibitori chimici per sopprimere la pigmentazione, garantendo chiarezza ottica per l'imaging.

Posiziona la piastra nella camera ambientale di un microscopio confocale ad alta risoluzione.

Utilizzando l'illuminazione a campo chiaro, individua la regione infetta.

Attiva i canali laser a fluorescenza, imposta le posizioni di inizio e fine dello stack Z e avvia l'imaging in time-lapse.

Visualizza il macrofago infetto, pieno di batteri fluorescenti, mentre diventa arrotondato e immobile.

Ciò indica il degrado del citoscheletro e l'insorgenza della morte delle cellule litiche.

Col tempo, il macrofago si gonfia e si rompe, rilasciando contenuti citoplasmatici e batteri interiorizzati nei tessuti circostanti, un segno distintivo della morte infi