Valutazione in vitro della uccisione batterica da parte dei fagociti splenici neonatali del topo

Inizia dissociando meccanicamente le milze neonatali per generare una sospensione a singola cellula.

Trasferisci la sospensione su un tubo, centrifuga e rimuovi il surnadante.

Risospendere il pellet nel tampone di lisi per eliminare gli eritrociti.

Aggiungi il tampone, centrifuga di nuovo e rimuovi il soprandante.

Risospendere le cellule in tampone e incubare con microsfere magnetiche rivestite di anticorpi che mirano a un recettore espresso su neutrofili e monociti infiammatori.

Centrifuga e rimuovi le perle non legate in centrifuga. Aggiungi il buffer, poi fai passare la sospensione attraverso una colonna ferromagnetica e applica un campo magnetico per trattenere le celle legate alla perla.

Rimuovere il campo magnetico, eluire le celle con il tampone e seminarle in una piastra multi-pozzo.

Aggiungi concentrazioni crescenti di batteri luminescenti in pozzi selezionati.

Incubare per permettere a neutrofili e monociti di interiorizzare i batteri tramite fagocitosi.

Sostituire il substrato con materiale contenente antibiotici per eliminare i batteri non interiorizzati.

Registrare la luminescenza a intervalli regolari per valutare l'internalizzazione batterica e la successiva uccisione indotta