Modellazione dell'infezione nei topi neonatali utilizzando batteri bioluminescenti incapsulati

Inizia con cuccioli di topo neonatali con età.

Solleva delicatamente la pelle dietro il collo di ogni cucciolo. Iniettare sottocutaneamente un cucciolo con una sospensione di batteri patogeni a bassa concentrazione e un altro con una sospensione ad alta concentrazione.

Questi batteri esprimono un operone bioluminescente che produce l'enzima luciferasi e il suo substrato, consentendo l'emissione autonoma della luce.

Una capsula protettiva di polisaccaridi circonda i batteri e maschera i loro antigeni superficiali, impedendo il riconoscimento da parte delle cellule immunitarie dei cuccioli.

Restituire i cuccioli alla madre biologica per le cure postnatali.

La proliferazione batterica nel sito di iniezione scatena infiammazione e aumenta la permeabilità vascolare, permettendo l'ingresso batterico nel flusso sanguigno e la diffusione sistemica.

Inserire i cuccioli anestetizzati sotto un sistema di imaging a luminescenza.

La luciferasi ossida il substrato per produrre luce visibile, permettendo la visualizzazione dei batteri all'interno dei cuccioli.

Acquisire immagini nel tempo per confrontare la crescita batterica e la diffusione nei cuccioli inoculati con concentrazioni batteriche alte e basse.

Inizia collocando i cuccioli con un'età corrispondente in gruppi di cucciolata ad alta o bassa dose all'interno di un armadietto di biosicurezza livello due. Nel terzo o quarto giorno postnatale, annota il peso di tutti i cuccioli prima dell'inoculazione.

Carica le siringhe di insulina con PBS o con la dose alta o bassa di E. Coli Lux inoculum nell'armadietto di biosicurezza e mettere le siringhe cariche sul ghiaccio.

Posiziona il neonato da iniettare su una superficie pulita all'interno dell'armadietto di biosicurezza e solleva la pelle sulla nuca come per coccolare il cucciolo. Inserisci la smussatura dell'ago appena sotto la pelle, nello spazio creato tra la pelle e il muscolo. Quando l'ago si sente sotto la pelle, iniettare 50 microlitri dell'inoculante mentre si rilascia contemporaneamente la parte della pelle pizzica per evitare il riflusso. Poi, rimuovi l'ago lentamente e con attenzione.

Quando tutti i cuccioli sono stati iniettati nello stesso modo, restituisci i cuccioli alle loro madri. Immediatamente dopo l'iniezione e nei momenti sperimentali appropriati, posiziona la gabbia con E. topi neonatali infettati da coli lux e si inseriscono in un cappuccio a flusso laminare di livello di biosicurezza due e aprono il software nel micro computer CT. Dopo aver inizializzato il sistema e atteso che la temperatura dello stadio si blocchi a 37 gradi Celsius e la temperatura CCD a -90 gradi Celsius, posizionare fino a quattro pup anestetizzati sulla scatola di imaging nella camera di imaging in posizione prona.

Chiudi la porta della camera di imaging e seleziona l'opzione di imaging luminescente. Seleziona filtro aperto e successivamente, imposta il filtro di eccitazione su blocco e il filtro di emissione su aperto. Seleziona 500, 520, 560, 580, 600 e 620 nanometri.

Poi, immagini i cuccioli prima di rimetterli nella gabbia con la madre, con monitoraggio fino al recupero dell'anestesia.