Iniezione intraperitoneale di lipopolisaccaride batterico nei topi per studiare le risposte immunitarie sistemiche

Inizia con un topo sveglio, trattenuto per limitarne i movimenti.

Inclina la testa verso il basso per esporre il basso ventre.

Individua la linea mediana addominale e individua un punto di iniezione leggermente fuori centro per evitare organi interni.

Successivamente, si prende una siringa contenente una soluzione di lipopolisaccaridi, un componente dell'involucro cellulare batterico Gram-negativo.

Inserire l'ago nel sito per accedere alla cavità peritoneale e iniettare la soluzione.

Una volta iniettata, la LPS entra nella circolazione sistemica e attiva una risposta immunitaria.

Nel flusso sanguigno, la LPS si lega alla proteina che lega la LPS, che la trasferisce al CD14, una proteina di membrana presente nelle cellule immunitarie.

CD14 consegna LPS a MD-2, una glicoproteina che si associa al recettore Toll-like 4 (TLR4), permettendo la dimerizzazione TLR4.

Il TLR4 dimerizzato recluta proteine adattanti che attivano le vie di segnalazione a valle, inducendo l'espressione di citochine proinfiammatorie e l'infiammazione sistemica.

Questo modella la traslocazione microbica e l'attivazione immunitaria sistemica nell'intestino e in altri organi causata da prodotti batterici.

Maneggia il topo con delicatezza ma con fermezza e immobilizza l'animale con una mano. Assicurati che il topo sia tenuto saldamente e possa respirare normalmente.

Inclina leggermente il naso del topo verso il pavimento per esporre l'addome all'iniezione. Individuare la linea mediana dell'addome e iniettare il volume di LPS necessario sul lato inferiore sinistro o destro.

È molto importante assicurarsi che l'ago entri nella cavità peritoneale per evitare iniezioni errate.

L'ago non dovrebbe inoltre penetrare troppo in profondità nella cavità peritoneale per evitare lesioni agli organi interni.

Rimetti delicatamente l'animale nella gabbia di casa.

Monitorare i topi per verificare la presenza e la gravità dell'endotossemia al momento dell'iniezione e ogni 2 ore successive per 8 ore. Annota le osservazioni nella scheda punteggio allegata.